Detección serológica del virus Mop-Top de la papa (PMTV) con anticuerpos policlonales obtenidos a partir de péptidos sintéticos del Gen CP-RT

Andrade, Derly (2012) Detección serológica del virus Mop-Top de la papa (PMTV) con anticuerpos policlonales obtenidos a partir de péptidos sintéticos del Gen CP-RT. Project Report. Universidad de Nariño, San Juan de Pasto.

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Resumen

El Potato mop-top virus (PMTV) es uno de los virus re-emergentes en los cultivos de papa de Colombia, como resultado del aumento creciente en las regiones productoras de su vector natural, el protozoo Spongospora subterranea f.sp. subterranea (Sss), agente causal de la sarna polvosa de la papa. El diagnóstico del PMTV presenta múltiples dificultades debido a su distribución irregular en las plantas, bajo título en los tejidos, movimiento sistémico de RNA virales infectivos y a la gran variedad de síntomas que induce en las diferentes variedades de papa. Por lo anterior, para la detección del virus se recomienda la realización simultánea de diferentes pruebas, así como la evaluación de múltiples submuestras por cada planta o tejido bajo análisis. Con el fin de ampliar el rango de herramientas de diagnóstico disponibles para la detección de PMTV, en este estudio se planteó el desarrollo de anticuerpos dirigidos al dominio RT de la proteína CP-RT codificada por el RNA2 del genoma viral. Para esto se secuenció parcialmente dicho segmento en un aislamiento colombiano de PMTV y se realizaron análisis bioinformáticos para ubicar en el dominio RT, regiones peptídicas con alto potencial inmunogénico. El péptido seleccionado fue inoculado en conejos para la obtención de anticuerpos policlonales, cuya utilidad fue evaluada a partir de pruebas de ELISA indirecto en muestras de plantas señuelo de Nicotiana benthamiana inoculadas con quistosoros de Sss y en plantas de papa directamente obtenidas de cultivos del municipio de La Unión (Antioquia). Estas pruebas estuvieron acompañadas con evaluaciones de RT-PCR dirigidas a confirmar la validez de la detección serológica. Los resultados indicaron que el segmento secuenciado del RNA2 contenía la totalidad del dominio RT, así como 441 nt del gen CP; los análisis filogenéticos y de identidad genética correspondientes, permitieron identificar a la cepa R25 como asociada al linaje de PMTV mundialmente distribuido. La inoculación del péptido sintetizado, permitió generar 19,26 mg de anticuerpos, los que resultaron efectivos para determinar la presencia de viriones de PMTV provistos de proteínas CP-RT, tanto en las muestras foliares y raíces de plantas señuelo como en aquellas de papa obtenidas directamente en el campo. La mínima concentración de antígeno detectable en ELISA indirecto fue del orden de 5x10-6µM, mientras que el título viral de los anticuerpos fue de 1:256.000. Por el método de dot-blot, el mínimo de detección de los anticuerpos anti_CP_RT fue de 1:8500 y la concentración mínima de péptido detectable de 5 µM. Considerando estos resultados, los anticuerpos generados en este estudio son altamente eficientes y sensibles para su utilización en diferentes métodos serológicos. Ya que se ha planteado que la proteína CP-RT es responsable de la transmisión del PMTV por Sss, la utilización de los anticuerpos reportados permitirán no sólo apoyar los programas de diagnóstico viral, sino también los estudios básicos y epidemiológicos tendientes a evaluar las interacciones del PMTV y su vector natural Sss.

Tipo de Elemento: Monografía (Project Report)
Información Adicional: Asesor: Mauricio Marín
Palabras Clave: ELISA, RT-PCR, solanum tuberosum, virus de RNA
Asunto: Q Ciencias > QH Natural history > QH301 Biology
Division: Facultad de Ciencias Exactas y Naturales > Programa de Biología > Trabajos de grado
Depósito de Usuario: Monitor COES 1
Fecha Deposito: 07 Dec 2016 22:27
Ultima Modificación: 07 Dec 2016 22:27
URI: http://sired.udenar.edu.co/id/eprint/3108

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