Martínez Palacios, Edison (2018) Estandarización de marcadores moleculares microsatélites en la ranita cutín de castelvi (Pristimantis farisorum) a partir de primers heterólogos. Project Report. Universidad de Nariño, Pasto.
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La ranita Cutín de Castelvi (Pristimantis farisorum) una rana distribuida en el corregimiento del Encano, Departamento de Nariño, zona que en los últimos años se ha visto afectada por las actividades antropogénicas, lo que lleva a pensar que P. farisorum este siendo afectada en su abundancia y diversidad genética. Es por ello, que este estudio se centró en dos objetivos determinar la abundancia relativa y estandarizar primers heterólogos que serán utilizados a futuro en los análisis de variabilidad genética. Con respecto al uso de marcadores microsátelites heterólogos (aislados en una especie y probados en otra), se requiere estandarizar las condiciones de amplificación como lo son concentración de: cloruro de magnesio, dNTP’s, primers, Taq polimerasa, y la correcta temperatura de anillamiento. Los resultados mostraron que en las cinco localidades muestreadas (Reserva el Buho, Vereda Bella Vista, Reserva Castelvi, Vereda Santa Teresita, Reserva el Bosque), la mayor abundancia relativa se obtuvo en la Reserva Natural el Buho con un valor de 1 y la más baja fue de 0, en la Reserva Natural Castelvi, lo que es de preocupación, dado que esta es el sitio de descripción de la especie. En las otras zonas se obtuvo una abundancia relativa baja. En cuanto a la estandarización de las condiciones de amplificación de los primers heterólogos, se utilizaron los primer Batman & Robin, Bert & Ernie, Laurel & Hardy, Beauty & The beast, Romeo & Julieta, Jean Paul & Simon y Thelma & Louis, propuestos por Elmer y Colaboradores (2006). Inicialmente, se hicieron pruebas con las condiciones originales propuestas y los resultados fueron negativos, dado que ningún primer amplifico en P. farisorum. Posteriormente, se procedió a usar las condiciones de la Taq polimerasa Platinum (Invitrogen), logrando la amplificación de 4 pares de primers. Aquellos primers que no amplificaron se sometieron a evaluación de concentraciones de cloruro de magnesio y de gradiente de temperatura, los resutlados mostraron que Romeo & Julieta amplifico a 2,5 mM concentración de magenesio y los primers Thelam & Louis y Jean Paul & Simon dieron resultados postivos con temperaturas de anillmiento de 59 °C y 62°C, respectivamente. Logrando asi la amplificación de los siete pares de primers. La eficiencia de amplificación, la reproducibilidad y la replicabilidad mostraron valores del 100% para todos los primers, lo que indica que estos primers pueden utilizarse en la genotipificación de los individuos de P. farisorum y con estos datos calcular la variabilidad genética y analizar su estado genético en el Municipio de El Encano.
| Tipo de Elemento: | Monografía (Project Report) |
|---|---|
| Información Adicional: | Asesores: Sonia Yaneth Mahecha Vahos Belisario Cepeda Quilindo |
| Palabras Clave: | ranita Cutín, Pristimantis farisorum, P. farisorum, microsátelites heterólogos |
| Asunto: | Q Ciencias > Q Science (General) Q Ciencias > QH Natural history > QH301 Biology |
| Division: | Facultad de Ciencias Exactas y Naturales > Programa de Biología > Trabajos de grado |
| Depósito de Usuario: | Monitor Biblioteca 3 Quijano Guerrero |
| Fecha Deposito: | 31 Jul 2023 20:56 |
| Ultima Modificación: | 31 Jul 2023 20:56 |
| URI: | http://sired.udenar.edu.co/id/eprint/9005 |
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