Screening de genes biosinteticos de policétidos (pks) en una biblioteca metagenomica proveniente de suelo Atlántico Brasilero

Castillo, Roger (2013) Screening de genes biosinteticos de policétidos (pks) en una biblioteca metagenomica proveniente de suelo Atlántico Brasilero. Project Report. Universidad de Nariño, San Juan de Pasto.

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Resumen

Actualmente, la metagenómica ha permitido conocer y estudiar con más detalle el material genómico desconocido en todos los ecosistemas que componen la tierra. El suelo se ha convertido en una fuente potencial de estudio, puesto que es un sistema complejo que alberga una gran cantidad y diversidad de microorganismos. El objetivo del presente trabajo fue realizar un screening de genes relacionados con la biosíntesis de policetídeos (PKS), con posible aplicación biotecnológica a partir de una biblioteca metagenómica del 2004 de suelo Atlántico Brasilero, construida con 5000 clones utilizando como vector a Escherichia coli DH10B pBAC/oriV e insertos de 40 y 50 Kb. La caracterización de los sistemas implicados en la biosíntesis de estas moléculas, sería una alternativa para dilucidar más ampliamente el potencial biotecnológico inmerso en las comunidades microbianas, así como entender más profundamente su papel ecológico. La primera etapa de este estudio fue la recuperación de los clones en medio LBAC. Posteriormente, se experimentaron varios protocolos para la extracción del vector: GeneJET Plasmid Miniprep (Thermo Scientific), AxyPrep Plasmid Miniprep (Axygen Biosciences), PureYield™ Plasmid Miniprep System (Promega) y QIAprep Spin Miniprep (Qiagen). No obstante, no se logró obtener buenos resultados, por ello fue necesario realizar un protocolo clásico modificado, con el cual se obtuvo buena calidad y cantidad de DNA. La amplificación de los genes asociados a los sistemas PKS I y PKS II fue realizada utilizando primers degenerados. Los clones positivos para los sistemas PKS fueron aislados y sus secuencias nucleotídicas y proteicas fueron analizadas por análisis bioinformático. El screening permitió la obtención de tres clones positivos para genes relacionados con el sistema PKS II. Se observaron variaciones en la secuencia de origen metagenómico y la secuencia del control positivo cuando fueron comparadas de acuerdo a su conformación molecular proteica, esto permitió dilucidar la posible relación existente en la conformación de rutas de biosíntesis de otros metabolitos secundarios.

Tipo de Elemento:	Monografía (Project Report)
Información Adicional:	Asesor Externo: Gabriel Padilla Maldonado PhD. Doctor en Genética de Microorganismos Instituto de Ciências Biomédicas Universidade de São Paulo, Brasil Asesora interna: Edith Mariela Burbano Rosero Phd. Doctora en Ciencias (Microbiología) Departamento de Biología Universidad de Nariño, Colombia.
Asunto:	Q Ciencias > Q Science (General)
Division:	Facultad de Ciencias Exactas y Naturales > Programa de Biología > Trabajos de grado
Depósito de Usuario:	Monitor COES 7
Fecha Deposito:	30 Nov 2016 22:57
Ultima Modificación:	18 Abr 2023 16:52
URI:	http://sired.udenar.edu.co/id/eprint/2086

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