Determinación de la fenilalanina amonio-liasa en extractos de hojas de cuatro variedades de ca- feto y en otros tejidos vegetales.

Tobar Carrizosa, Miguel Y Mora Espitia, Humberto (1983) Determinación de la fenilalanina amonio-liasa en extractos de hojas de cuatro variedades de ca- feto y en otros tejidos vegetales. Project Report. Universidad Nacional, Bogota.

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Resumen

Determinación de la fenilalanina - amonio-liasa en extractos de hojas de cuatro variedades de cafeto y en otros tejidos vegetales. Dada la importancia de la P.A.L. en el metabolismo fenilpropanoide y siendo los isoflavonoides un tipo de fitoalexinas derivadas de éste es lógico considerar la P.A.L. dentro del estudio de los factores de resistencia (en el caso concreto del café a la roya Hemileia vastatrix Berk. & Br.). Dentro de este estudio es fundamental la determinación de los niveles endógenos de esta enzima y de los factores que pueden inducir a su actividad, constituyéndose este en el principal objetivo del trabajo. En hojas de cafeto variedad Caturra hasta el momento solo ha sido posible detectar la presencia de la P.A.L. cuando el extracto se producía por homogenización directa de las hojas frescas con solución tampón en presencia de ácido ascórbico (Martínez et al. 1981), sin que fuera posible su cuantificación; éste hecho dificulta el estudio de su relación con la resistencia a enfermedades, máxime cuando no era posible partir de un material homogéneo como lo es el polvo de acetona. En el presente trabajo se establece una técnica de extracción basada en el método normal de preparación de polvo de acetona a par- tir de material vegetal; pero considerando que la P.A.L. puede exis- tir en forma inactiva y que por lo tanto para su determinación es ne- cesario pasarse previamente a una forma activa; además se optimizan parámetros que permitan incrementar su actividad. Para la preparación de polvo de acetona se utiliza una solución de 2-mercaptoetanol al 1% V/V en acetona. A partir de extractos de hojas de cafeto variedad Caturra se es- tandarizaron los siguientes parámetros y condiciones de extracción P.A.L. fuerza iónica de la solución tampón extractora, tiempo de re- suspensión del polvo de acetona en la solución tampón extractora; en- contrándose como óptimas para la extracción: Solución tampón de bo- ratos 0.1M pH 8.8 y un tiempo de resuspensión del polvo de acetona de 60 minutos (540 r.p.m.) En lo referente a los factores que afectan la actividad enzimáti- ca se establece: La temperatura ejerce un efecto positivo sobre la actividad de la P.A.L. en el intervalo de 25-40°C en extractos provenientes de primeros y segundos pares de hojas de cafeto, siendo mayor este efecto para primeros pares; por lo cual es aconsejable utilizar los polvos de acetona provenientes de primeros pares de hojas de cafeto. La enzima no pierde actividad en un período de 4 horas después de obtenido el extracto si este se mantiene a 0°C.Al analizar el efecto de la concentración del sustrato (L-fenilalanina) sobre la actividad de la P.A.L., se encuentra que su concentración óptima es 4 mM y que por encima de esta concentración se presenta inhibición.La fracción proteíca que presenta actividad de P.A.L. tiene un peso molecular mayor de 300.000 Daltons.Al comparar los niveles enzimáticos de la fenilalanina amonio-liasa en extractos de primeros pares de hojas de cafetos resistentes a la Hemileia vastatrix Berk. & Br. (grupo fisiológico A) como lo son el Híbrido de Timor y el Catimor A y susceptibles (grupo fisiológico E) así como el Caturra y el Catimor E; se encuentra que los niveles mayores los presentan las variedades resistentes obteniéndose en escala descendente respecto a actividad específica total al siguiente orden: Catimor A (53.434 $\mu$U.A./mg $P_T$) Híbrido de Timor (17.697 $\mu$U.A./mg $P_T$), Caturra (10.516 U.A./mg $P_T$) y Catimor E (6.772 $\mu$U.A./mg $P_T$).La estandarización del método enunciado se efectuó después de demostrarse que no es el tratamiento con acetona el que impide la detección de la actividad de la P.A.L. para ésto se prepararon polvos de acetona a partir de discos de tubérculos de papa donde ya se había detectado y cuantificado la P. A. L. Al mismo tiempo se corroboró el efecto benéfico de la exposición del material vegetal a la acción lumínica hasta por períodos de 32 horas y del aumento de temperatura durante la reacción hasta 40°C , estableciéndose que a períodos mayores se sensibiliza la enzima al efecto desnaturalizante de temperaturas superiores a 40°C.

Tipo de Elemento:	Monografía (Project Report)
Información Adicional:	Dir. de tesis: Dra. Virginia Montes de Gomez Dra. Sielke Sielvers
Palabras Clave:	Fenilalina,Cafe,Niveles-endogenos
Asunto:	Q Ciencias > QD Chemistry Q Ciencias > QK Botany S Agricultura > SB Plant culture
Division:	Facultad de Ciencias Exactas y Naturales > Programa de Química > Trabajos de grado
Depósito de Usuario:	Monitor Biblioteca 3 Quijano Guerrero
Fecha Deposito:	12 Mar 2026 16:59
Ultima Modificación:	12 Mar 2026 16:59
URI:	http://sired.udenar.edu.co/id/eprint/17898

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